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開發用於治療法布瑞氏症的α-半乳糖苷酶和類胰島素生長因子2嵌合式酵素蛋白

為了解決gla200價格的問題，作者李萍惠 這樣論述：

　　法布瑞氏症為X染色體性聯遺傳疾病，發生率約為五萬分之一，而研究發現在台灣的發生率極高（男性約1/1,500；女性約1/800）。其致病原因主要為GLA基因發生突變，導致酵素蛋白功能異常。缺乏α-半乳糖苷酶酵素使得細胞無法正常代謝鞘糖脂，導致鞘糖脂大量堆積於細胞溶酶體當中，進一步使細胞受損而影響器官功能產生疾病。　　對於法布瑞氏症最有效的方法為酵素替代療法，目前我國衛生福利部已核准兩種用於治療法布瑞氏症的酵素蛋白藥物，分別為 Agalsidase alfa（Replagal®, Shire）與Agalsidase beta（Fabrazyme®, Sanofi）。酵素治療可有效延緩症狀的發

生，但是現行的酵素替代療法價格昂貴、且患者須長期輸注，因此如何開發新的治療策略提高療效、改善長期輸注的模式便顯得相當重要。酵素治療主要是將α-半乳糖苷酶酵素透過靜脈輸注到患者體內，透過細胞膜上的甘露糖六磷酸根受體進入溶酶體，分解過度堆積的糖鞘脂。先前研究發現第二型胰島素生長因子（IGF2）也可以被非陽離子依賴型甘露糖六磷酸根受體辨識結合，因此後續研究便開始嘗試將蛋白酵素與IGF2部分胜肽片段結合，發現此嵌合蛋白確實能增加進入細胞溶酶體內的效率。在本研究中，我們藉由建構第二型胰島素生長因子α半乳糖苷酶嵌合重組蛋白，並測試其是否能提高細胞的吸收效率，進而提高治療的效果。　　先前本實驗室已經利用CR

ISPR/Cas9的技術成功建立GLA基因剔除HEK293細胞株，同時我們也建構不同形式的嵌合蛋白。接著轉染至GLA基因剔除HEK293細胞株使其過度表現嵌合蛋白，最後發現將IGF2部分胜肽片段嵌於GLA的羧基端為最具有酵素活性。在細胞吸收的實驗中，我們發現此形式的嵌合重組蛋白與野生型重組蛋白相比，其被細胞吸收的效率有9.8倍的提升。我們進一步利用GLA基因剔除HEK293細胞株製作GLA-IGF2嵌合式蛋白的穩定表現細胞株（stable clone），避免內生性蛋白的干擾，做為大量製備嵌合式重組蛋白的來源。接下來將大量純化嵌合式重組蛋白，探討嵌合式重組蛋白對於細胞內Gb3的清除能力。期許藉由

嵌合式重組蛋白的開發，提升法布瑞氏症患者現行酵素治療的療效。