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以分子生物學診斷新包蟲症於乳汁樣本

為了解決romand新品的問題，作者簡銘毅 這樣論述：

新包蟲症 (Neosporosis)為動物感染新包蟲 (Neospora caninum)後所造成的傳染性疾病；新包蟲為一種自1988新發現的新品種原蟲寄生蟲，目前已被視為導致牧場乳牛流產的一個重大病因，目前已在許多國家的乳品產業造成重大經濟損失。感染新包蟲的乳牛大多不具明顯的臨床症狀並且具有很高的垂直感染機率，目前仍無對新包蟲有效的藥物或者疫苗，為了減少損失，檢測並淘汰已感染的牛隻被視為降低經濟所失的一重要策略。抗體的檢測方面，檢測乳汁被視為能得到與血液樣品相似的結果，然而和分子生物學相比，血清學的檢測相對下仍較不具說服力。此篇研究目的在於嘗試在羊乳及牛乳中的檢測出新包蟲DNA，特別是在於

初乳的檢測，並且發展環型恆溫核酸偵測法(LAMP)搭配乳汁樣本來快速檢測新包蟲症。 使用一般PCR與nested PCR於檢測乳汁中的新包蟲DNA，共有582個羊乳樣本與55牛乳樣本被檢測；在使用一般PCR上，582個羊乳樣本中檢測出3個為陽性，而使用nested PCR則檢測出130陽性結果，其中122個為初乳樣本，約占93%；而在55牛乳樣本中，使用一般PCR則沒有檢測到陽性反應，使用nested PCR則檢測到10個陽性結果，其中9個為初乳樣本，占90%。所有PCR與nested PCR產物皆被送去定序已確認其產物是否為新包蟲的DNA核酸；本實驗結果為全球第一次於羊乳樣本中檢測到新包蟲

的核酸DNA，此外，不論是在羊乳或牛乳中，初乳樣本接檢測到高陽性率，從此結果看出，在診斷新包蟲上，初乳可作為一重要且良好的樣本來源。NCHU-5引子被設計應用於環型恆溫核酸偵測法(LAMP)來檢測新包蟲，結果顯示NCHU-5引子在檢測新包蟲於乳汁樣本上有良好的檢測結果，並且對Toxoplasma gondii、Cryptosporidium parvum 與 Giardia lamblia DNA呈陰性反應，此結果顯示NCHU-5引子為新包蟲DNA具有良好的專一性。另外，搭配加入SYBR green I於LAMP產物中，藉由肉眼觀察其顏色變化可快速並簡易得到檢測結果，從以上實驗結果可以看出，N

CHU-5適合用於現場來快速檢測新包蟲。

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