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國立成功大學 化學工程學系 張嘉修所指導 張藝齡的 整合藻菌共生及創新二階段系統進行高效環保的牛場廢水處理 （2020），提出dj1 9代關鍵因素是什麼，來自於藻菌共生、牛場廢水處理、活性碳、固定化載體、小球藻、半批次操作、碳水化合物、循環經濟。

而第二篇論文輔仁大學 應用科學與工程研究所博士班 劉席瑋所指導 周彥瑢的 高效能超音波萃取龜鹿二仙膠於骨關節炎的療效研究 （2018），提出因為有 退化性骨關節炎、龜鹿二仙膠、超音波萃取、骨性關節炎小鼠動物模式的重點而找出了 dj1 9代的解答。

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整合藻菌共生及創新二階段系統進行高效環保的牛場廢水處理

為了解決dj1 9代的問題，作者張藝齡 這樣論述：

牛場廢水含有大量有機物、氮和磷等成分，直接排放會造成嚴重的優養化和環境汙染。常見的牛場廢水處理方式是進行厭氧消化，不但可以進行廢水處理，還能產生沼氣來發電，然而此方法有後續沼渣與沼液需處理的問題。因此，本研究乃應用藻菌共生系統進行牛場廢水之生物處理；主要是利用藻菌之協同作用，有效去除廢中之有機質及營養鹽，且產生之微藻生物質可進行加值利用。微藻生物質富含豐富的養分，可以轉化成更有價值的副產品，例如生質能源、飼料和肥料等，並可減少好氧處理過程所產生大量污泥而造成的二次汙染。本研究的目標是以最適化操作策略設計出一個有效的藻菌共生系統，並配合工程策略來處理能場廢水，以達到國內牛場廢水之排放標準。此外

，本研究亦探討微藻和細菌的最佳共培養條件，且評估藻菌共生系統對牛場廢水處理的效率。本研究首先探討微藻和細菌在牛糞廢水處理上分別具有的不同功能，發現微藻的生長在未滅菌的情形下明顯優於滅菌的牛糞廢水，而且在細菌的存在下能去除更多的有機物，且實驗結果顯示微藻的主要功能是去除廢水中的氮和磷。接著，根據未滅菌的牛場廢水處理效率和微藻生長情形來篩選出適合處理牛場廢水的藻種，發現Chlorella sorokiniana AK-1在對牛場廢水之耐受性和汙染物的去除，皆有最佳的表現，且可直接培養在50%未滅菌的牛場廢水，因此降低培養微藻所需的培養基成本，以牛場廢水培養出的Chlorella sorokinia

na AK-1其生物質中富含碳水化合物，可達到最高含量47.6±2.7%和最大產率17.8±2.2 g/L/d，其次分別為蛋白質、脂質和葉黃素，最高含量分別為19.1±2.5%、15.8±1.8%和1.7±0.31 mg/g，而最大產率分別是7.4±1.7 g/L/d、5.2±1.2 g/L/d和0.65±0.08 mg/L/d。為了改善牛場廢水有機物之去除效率，透過曝氣2vvm的半間歇操作的方式和90%的高置換率來馴養牛場廢水當中的有效菌群，發現加入0.4 g/L的馴化混菌並同時降低曝氣量(0.2 vvm)可有效改善有機物的去除效率。並發現最適化微藻接種量是0.10 g/L且和0.4 g/L

的馴化混菌共培養在50%未滅菌的牛場廢水，經過7天培養後，藻菌共生系統相較於純菌和純藻系統展現出最好的微藻生長情形和營養鹽移除效率，且最大藻體濃度可達4.32±0.31 g/L，而COD、BOD、TN、NH3N和TP的移除效率則分別為85.3±1.3%、98.0±0.2%、86.0±4.9%、99.6±0.0%和100.0±0.0%。此外，本研究評估不同的微藻接種時間是否會影響牛場廢水處理，發現在第0天僅接種混菌，而於第3天再接種微藻Chlorella sorokiniana AK-1，可提升COD和TN的移除效率。相對於第0天同時接種混菌及微藻AK-1，其COD和TN的移除效率分別從80.5

±2.4%和83.9±2.9%，提升到84.3±3.2%和90.2±2.4%。且於廢水處理3天後再加微藻時，總懸浮固體（TSS）和揮發性懸浮固體（VSS）在經過重力沉降2小時後可分別從1725±290 mg/L和1621±176 mg/L降低到256±72 mg/L和230±49 mg/L，可以得知藻菌的自聚集效果更加明顯，導致藻體沉降能力更好，有利於後續生物質之收集。藉由次世代定序(NGS)分析藻菌共生系統，發現存在牛場廢水中的主要菌群如下：Rhizobiaceae Sericytochromatia unclassified, Pirellula sp, Devosia unclassif

ied, Acinetobacter unclassified, Acinetobacter towneri 及Owenweeksi。最後，本研究採用工程策略來提高廢水汙染物移除效率和穩定性，實驗可以分成兩部分，(1) 固定化載體的添加，以及(2) 創新的兩階段程序。在固定化載體的部分，添加3 wt%活性碳可以提升藻菌共生系統對牛場廢水汙染物移除之效率。而創新二階段程序則是根據上述第三天接種C. sorokiniana AK-1來提升整體廢水處理效果，此程序分為兩個槽來縮短廢水處理的時間，且每個循環所花費的處理時間縮短為3天，第一槽的功能是利用細菌大量移除牛場廢水中的COD和BOD，之後再利用

第二槽中的藻菌共生系統將TN和TP降至更低的濃度。實驗結果顯示，在最適化90%置換率和3 wt%活性碳添加的條件下，牛場廢水的負荷量可以從55.6%提升到77.8%，且COD、BOD、TN和TP的移除效率可達90-99%，且處理後的放流水符合國內牛場廢水之排放標準 (即COD < 450 mg/L、BOD < 80 mg/L)。COD、BOD、TN和TP的平均出流水含量在77.8%的廢水負荷下分別從3936±888 mg/L、1492±57 mg/L、186.6±25.6 mg/L、71.3±10.1 mg/L降到405±73 mg/L、68±8 mg/L、14.0±1.1 mg/L、1.0±

0.7。綜合上述，本研究不僅發展出有效且創新的藻菌共生廢水處理系統，且因為產生的微藻生物質具有高含量的碳水化合物，可製成肥料和生物碳來增加廢水處理額外的利益，而實現經濟循環的概念。此外，以此環境友善的藻菌共生工法進行高效率的牛場廢水處理，彰顯其永續環保的特性及未來商業化應用之潛力。

高效能超音波萃取龜鹿二仙膠於骨關節炎的療效研究

為了解決dj1 9代的問題，作者周彥瑢 這樣論述：

研究背景：退化性骨關節炎(Osteoarthritis, OA)又稱骨性關節炎，是人類關節疾病中最普通的一種，台灣地區成年人罹患OA的比例高達15%(全球比約為6%)。其發生原因主要是關節軟骨的蛋白多糖(Proteoglycans)及第二型膠原白（Type II collagen）的流失與胞外基質(ECM)的瓦解。其臨床病徵為關節軟骨退化，骨骼相互摩擦，造成發炎與劇烈疼痛，肢體關節活動障礙，最終導致關節殘疾。目前OA主要是以藥物治療來緩解關節疼痛，長久以來是利用非類固醇消炎止痛藥如希樂葆(Celecoxib)、阿斯匹靈(Aspirin)來減輕疼痛和抗發炎或是普拿疼(Acetaminophen

)來做短期的疼痛控制。有逐漸增多的證據顯示，這些非類固醇藥物可能會抑制蛋白多糖的合成，如此不但沒有緩和骨關節炎的發展，實際上可能加速它的惡化。近年來醫界研究也指出，葡萄糖胺能減緩關節的損壞和軟骨耗損，但無法解決關節發炎所帶來的腫脹疼痛及後續軟骨損傷所引起的自體酵素侵蝕破壞軟骨基質的問題。 「龜鹿二仙膠」Guilu Erxian Jiao (GEJ)，由君藥龜板、鹿角、臣藥人參、佐藥枸杞，四味藥方組合而成。中醫臨床上常用來預防或輔以治療骨質疏鬆症，更由於它除了可補充人體的鈣質和膠質，尚能增加膠原合成和蛋白多醣的分泌，可以延緩軟骨的磨損退化，所以對 OA 有不錯的改善作用。「龜鹿二仙膠」的製程

繁複。因此，本研究利用高效超音波萃取技術，增加主要活性成分與膠質類(如膠原蛋白)的提取效能，期以此萃取技術來改善並解決傳統龜鹿二仙膠方濟之萃取製程所面臨的問題，進而投入緩解關節炎症狀相關的動物及臨床實驗。研究目的：本研究利用高效超音波萃取技術，取得提取效能提高的龜鹿二仙膠(GEJ)。架構一系列的動物實驗及人體臨床實驗，進行多項關節炎功效評估，來探討GEJ改善關節炎的功效性驗證與作用機制，進而開發緩解關節炎症狀之龜鹿二仙膠方劑衍生性關節保治療藥物或保健原料。研究方法：本研究首先以軟骨細胞損傷模式(模擬退化性關節炎)，來評估傳統複方龜鹿二仙膠(GEJ)的超音波萃取物，是否有對大鼠膝關節軟骨細胞(C

518)有預期的保護作用(MTT assay)。接著以前十字韌帶橫斷術(anterior cruciate ligament transection/ACLT)及長期跑步機運動傷害建立OA小鼠動物模式(Osteoarthritis mice model)，以連續28天口服 GEJ (100,300mg/kg/day)藥物治療後來進行觸覺敏感度試驗Von Frey testing、開放空間測試（Open Field Test）行為模式測定、 X-ray檢查等。並利用Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)、Quantitative real-time P

CR (qPCR)與 Hematoxylin and eosin stain(H&E stain)等方法，依據多項關節炎功效評估驗證標的，如指標性關節炎相關生物標記biomarkers (如IL-1β、IL-6與TNF-α)與軟骨組織切片染色評估(細胞內基質collagen)等，來探討GEJ改善關節炎的功效性驗證與作用機制。最後透過28天餵食毒性試驗(28-day feeding toxicity study)，測試 GEJ可能產生之毒性影響，或是藉由超音波萃取作用降低龜鹿二仙膠傳統製程後，萃取物本身所可能引起的副作用。本研究也進行GEJ臨床療效探討，希望開發新劑型具治療性中藥製劑的需要，以嘉

惠退化性關節炎的患者。研究結果: 小鼠以ACLT+跑步訓練誘導OA後，進行痛觸覺敏感測試 Von Frey及開放空間行為測試（Open-field behavioral Test），評估GE-P&GE-L300 mg/kg/day機械性觸痛覺耐受度變高且GE-P&GE-L300 mg/kg/day機械性觸痛覺耐受度較celecoxib 佳。X光檢測評估 GE-L (300 mg/kg/day)相較於celecoxib (10mg/kg/day) 為有較佳療效於減少軟骨下硬骨增厚或軟骨侵蝕。整體結論可歸納出:GEJ作用ACLT-OA小鼠，劑量濃度越高，越能顯著減少溶骨性病變。Q-PCR定量評估表

示GEJ及celecoxib能抑制促發炎細胞激素（IL-1β，IL-6和TNF-α）的表現而減緩骨關節炎;其中GE-L(300 mg/kg/day)作用療效最佳。另外應用(MCID) 來評估關節軟骨中炎性細胞因子（IL-1β和TNF-α）蛋白質表現，表示GEJ extracts在ACLT-OA的關節軟骨組織中能抑制促發炎細胞激素IL-1β、IL-6和 TNF-α mRNA及蛋白質的表現。所有的ACLT-induced OA小鼠histopathological study，顯示GEJ extracts 依濃度能減緩軟骨損傷侵蝕藉改善軟骨細胞退化及關節軟骨表面不平整的程度。結論: 對於退化性骨關

節炎(Osteoarthritis, OA)之表現以關節疼痛為主，臨床上目前還是缺乏有效治療的藥物。本研究的目的就是從現有中藥複方製劑中尋找有療效的標的物進行一系列的實驗，根據研究結果可發現龜鹿二仙膠萃取物(GE-P，GE-L)相較於 Celecoxib更能達到改善關節疼痛及軟骨基質分解以減緩關節炎的發展與進程，其中以GE-L(300 mg/kg/day) 療效最佳。由本研究結論可知，GE-L（一種不易於口服給藥的新型GE-P替代品）的抗關節炎作用優於一般的藥物治療。這些結果也突顯出了開發新劑型具治療性中藥製劑是有發展性的。

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