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筊白筍苯丙胺酸裂解酶之生化學研究

為了解決Mio 848 vs 856的問題，作者鄭仲淵 這樣論述：

苯丙胺酸裂解 (phenylalanine ammonia-lyase, PAL EC 4.3.1.5) 是植物 phenylpropanoids 生合成之第一個酵素。此酵素催化苯丙胺酸 (phenylalanine) 經過非氧化型脫氨反應產生肉桂酸 (trans-cinnamic acid)。這個反應導致植物二級代謝產物及大量的 phenylpropanoid 衍生物生合成，包括木質素 (lignin)、黃酮素 (flavonoid) 等。本論文以筊白筍為材料；經緩衝液粗抽、硫酸銨分劃、膠體過濾法 (Sepharacyl S-300)、疏水性作用層析法 (Phenyl-Sepharose)

及快速蛋白質液相層析法 (FPLC) 後，得到純化倍率為 110.5 倍，比活性為 53.3 nkat/mg protein。以膠體過濾法 (Superose 6, Superose 12) 測得之 PAL 原態分子量介於 290-300 kD，其次單元體分子量由 SDS-PAGE 測得約為 75 kD，因此推測筊白筍 PAL 可能為同質四元體結構。藉綠竹之 PAL 抗體進行西方點墨法顯示純化所得確實為 PAL，並將所得之 PAL 進行相關生化學研究 筊白筍與其他禾本科植物之 PAL 具有類似生化性質。苯丙胺酸裂解酶對基質 Phe 之 Km 值為筊白筍 516 μM。酵素最適反

應溫度為 45℃。活化能為16.1 kcal/mol；最適反應 pH 為 8.5。鈣、鎂、錳在低濃度事會活化 PAL 活性；鈷、汞離子則會抑制。二級代謝產物，包括 trans-cinnamic acid、p-coumaric acid、ferulic acid、p-amino-benzonic acid 以及 caffeic acid，有產物回饋抑制現象。PAL 對基質 L-Phe 有專一性。酵素催化作用之活化中心具有 serine、tyrosine、histidine 等胺酸。

綠竹葉與籜苯丙胺酸裂解酶之生化學研究

為了解決Mio 848 vs 856的問題，作者謝陸盛 這樣論述：

苯丙胺酸裂解酶 (phenylalanine ammonia-lyase, PAL EC 4.3.1.5) 是植物 phenyl- propanoid 生合成之第一個酵素。此酵素催化苯丙胺酸 (phenylalanine) 經過非氧化型脫氨反應產生肉桂酸 (trans-cinnamic acid)。這個反應導致植物二級代謝產物及大量的 phenylpropanoid 衍生物生合成，包括木質素 (lignin)、黃酮素 (flavonoid) 等。 本論文以綠竹各種不同器官為材料，包括竹葉、竹籜；經緩衝液粗抽、硫酸銨分劃、膠體過濾法 (Sepharacyl S-200)、疏

水性作用層析法 (Phenyl-Sepharose)、離子交換法 (DEAE-Sepharose) 及快速蛋白質液相層析法 (FPLC) 後，得到純化倍率分別為竹葉 78 倍及竹籜 124 倍，比活性分別為 15 nkat/mg protein 和 88 nkat/mg protein。以膠體過濾法 (Superose 6, Superose 12) 測得之 PAL 原態分子量介於 275-290 kD，其次單元體分子量由 SDS-PAGE 測得約為 70 kD，因此推測綠竹 PAL 可能為同質四元體結構。以過碘酸硝酸銀醣染結果顯示：竹籜 PAL 可能是醣蛋白。利用 Q-TOF MS 來進行

PAL 胺酸定序，結果顯示純化所得確實為 PAL。 綠竹葉與籜 PAL 具有類似之生化性質。苯丙胺酸裂解酶對基質 Phe 之 Km 值分別為竹葉 550 μM 及竹籜 476 μM。酵素最適反應溫度為 50℃，活化能分別為竹葉 13.9 kcal/mol，竹籜 11.8 kcal/mol；最適反應 pH 為 9.0，酵素活性會受到鈣、鎂、錳、鈷、汞離子的抑制。二級代謝產物，包括 trans-cinnamic acid、p-coumaric acid、ferulic acid、p-amino-benzonic acid (PABA) 以及 caffeic acid，有產物回饋

抑制現象。PAL 對基質 Phe 有專一性。酵素催化作用之活化中心具有 serine、tyrosine、histidine 等胺酸。