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以RNA進行非小細胞肺癌標靶治療的基因檢驗：應用於惡性肋膜積水與支氣管鏡刷取等細胞學檢體

為了解決CB400 V3的問題，作者蔡子修 這樣論述：

標靶治療的發展是非小細胞肺癌治療的重大進展。近來一些重要的臨床試驗顯示腫瘤細胞的特定基因變異，是決定某些非小細胞肺癌標靶藥物效果的重要預測因子。據此，以臨床檢體進行基因檢測，已成為晚期非小細胞肺癌患者診治的重要環節。然而由於考慮標靶治療的患者處於無法手術治療的疾病晚期，因而診斷檢體常侷限於小的生檢切片或細胞學檢體，而這些檢體往往不足以進行分子檢驗。因應這樣的挑戰，發展能以微小或非組織學檢體檢測腫瘤基因變異的方法，將有助於篩選更多能對標靶治療產生反應的患者。 惡性肋膜積水是非小細胞肺癌常見的併發症，而積水的採檢相對容易、較不具侵襲性、而且可以反覆進行。然而，以惡性肋膜積水的細胞基

因體DNA進行Sanger氏定序，已被證實無法靈敏的檢測EGFR基因突變。事實上，由於非腫瘤細胞的干擾，以異質性檢體進行直接定序以偵測腫瘤細胞基因變異並不靈敏。由於惡性肋膜積水中的非腫瘤細胞不表現EGFR基因，或僅有低度表現，我們因而假設以細胞RNA作為初始模版的EGFR基因定序，可能可以減少非腫瘤細胞的干擾。在我們的研究中，我們平行比較了三種方法（以細胞的RNA進行定序、以及以基因體DNA進行定序或質譜儀分析），用於肺腺癌惡性肋膜積水檢體的EGFR基因突變檢測。其結果顯示以RNA進行EGFR基因定序，可以大幅改善從惡性肋膜積水檢體偵測EGFR基因突變的靈敏度。而由於RNA 定序的突變偵測率較

佳，伴隨著對第一線EGFR酪氨酸激酶抑制劑臨床療效的預測也較準確。對於發生後天抗藥性的患者，以RNA進行的EGFR基因定序對續發性T790M突變的偵測結果也令人滿意。 雖然我們證實RNA定序適用於惡性肋膜積水檢體的EGFR基因突變檢測，然而由於 RNA 本質不穩定，以及廣泛存在於環境的核糖核酸酶，因此應用此技術必須審慎的進行檢體的處理，也因此限制其在臨床實務的普及性與用途。免疫細胞化學染色是已經確立的技術，而且經常做為惡性肋膜積水的輔助評估方法。最近已發展出對兩種主要突變形式（L858R 點突變與第19外顯子的E746-A750剔除）的EGFR蛋白質具有專一性結合，可以應用於免疫染色的兔

子單株抗體。我們的研究顯示，以這兩種突變專一性抗體進行惡性肋膜積水的免疫細胞染色，對設定檢測的EGFR基因突變，具有相當不錯的偵測靈敏度與精確性。相對於患者的臨床特性，積水的免疫細胞染色對第一線EGFR酪氨酸激酶抑制劑的腫瘤治療反應與無進展存活期，也提供了較好的預測。 過去十年來，微型圓徑探頭支氣管內超音波的發展，已大幅改進以軟性支氣管鏡檢查評估周邊型肺癌的成效。這個進展帶來的一個新的議題，亦即這項技術提供的檢體是否也能夠用於分子檢驗。由於我們證實以RNA為模版的Sanger氏定序，非常適用於細胞學檢體的突變分析。在本研究中，我們也探討利用支氣管內超音波輔助取得的剩餘刷取檢體，評估以RN

A的Sanger氏定序進行多基因（EGFR基因、KRAS基因、與EML4-ALK融合基因）分析之可行性。研究結果顯示實施此多基因檢測方式的成功率極高，而且突變的偵測結果也相當好。結合肺癌診斷中日益普及的高階支氣管鏡檢查技術，與此一有效檢測腫瘤基因變異的方法，將可有效的篩選更多的晚期非小細胞肺癌患者，依據其腫瘤細胞的分子特性，決定個別化標靶藥物的治療。 總結而言，我們的研究針主要著重如何使非小細胞肺癌標靶治療的預測性基因變異檢測能更有效與廣泛的應用。要根據腫瘤基因的變異篩選非小細胞肺癌的標靶治療，首先需要實際與有效的取得可用的檢體，並發展適合這些類型臨床檢體的基因檢測方法。值得注意的是，我

們的研究顯示簡單的以細胞的RNA取代基因體DNA作為分析的初始模版，可以讓傳統的Sanger氏定序適用於以異質性檢體檢測標靶治療預測性的基因變異。除了改善Sanger氏定序的靈敏度，此種基因分析方式的其他特徵，如增加微小檢體的核酸量、對帶有多重外顯子的基因可以減少所需的的複製與定序反應次數、以及可以用相同的方法分析基因突變與重組等，使其進一步適用於多基因的檢測。