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以嗜甲醇酵母菌建構重組乳鐵蛋白素之基因表現系統可行性研究

為了解決r350價格的問題，作者黃哲祥 這樣論述：

乳鐵蛋白素 (lactoferricin, Lfcin) 是乳鐵蛋白 (lactoferrin, Lf) 經胃蛋白酶 (pepsin) 水解後，具有最佳抗菌活性的胜肽片段。研究指出，牛的 Lfcin 可有效抑制大腸桿菌 (Escherichia coli) 和金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 等病原菌，有作為抗菌劑或防腐劑應用於食品領域的潛力。此外，Lfcin 若與乳酸鏈球菌素 (nisin) 複合使用，能提升其抗菌能力的廣效性並降低抗菌胜肽 (antimicrobial peptides, AMPs) 的施用量。然而，Lfcin 目前主要由化學合成方式取得，其

價格昂貴且產量有限。故本研究探討利用基因表現系統產製重組 Lfcin，提高未來應用的可行性。藉由最低抑制濃度 (minimum inhibitory concentration, MIC) 試驗顯示基因轉殖宿主菌株 Pichia pastoris BCRC 21531 及 Lactococcus lactis NZ3900 對 Lfcin 和 nisin 具合宜的耐受性。分別成功利用 pPICZαA 和 pNZ8149 建構重組基因 Lfcin 的表現載體後，各別使用熱休克法 (heat shock) 與電穿孔法 (electroporation) 轉形至目標菌株中，利用選別培養基平板進行初步

篩選，並透過聚合酶鏈鎖反應 (polymerase chain reaction, PCR) 確認，結果顯示嗜甲醇酵母菌成功轉形，但乳酸乳球菌表現系統之重組質體基因穩定性差，故後續著重於酵母菌表現系統之研究。轉殖菌株 PP531/pPICZαA-Lfcin 乃利用甲醇誘導重組 Lfcin 蛋白的生產，並使用十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳 (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE) 確認產生之重組蛋白大小約為 6 kDa。隨後利用圓筒平板法 (cup and plate method) 測試該誘導細

胞培養液對於 E. coli 的抗菌活性得正反應。後續再以動態抑制生長曲線 (dynamic inhibition growth curve) 進行 E. coli 生長抑制試驗，於蛋白質誘導液濃度為 5 mg/mL 時，可抑制 E. coli 生長約 10 小時，而當濃度達 10 mg/mL 時，可降低病原菌穩定期 (stationary phase) 的總菌數，表現出重組 Lfcin 的抑菌效果。另外，轉殖菌株的生長曲線顯示其生長速度較未轉形菌株更快，可減少遲滯期 (lag phase) 達 10 小時。利用掃描式電子顯微鏡 (scanning electron microscope, S

EM) 進行菌株型態的觀察發現，其外型呈現圓潤球狀，直徑從原始菌株的約 3 μm明顯縮小至約 1 μm，且菌體明顯聚集成團狀。綜上所述，本研究之轉殖菌株 PP531/pPICZαA-Lfcin 重組基因穩定且生長快速，具有大量產製重組 Lfcin 的潛力，同時也可作為食品添加物、保健品或畜產飼料的添加劑，應用於新型態商品的開發。

具國際人道主義精神之古巴醫療外交

為了解決r350價格的問題，作者林佳慧 這樣論述：

古巴獨立之前，古美的政治經濟關係非常密切，美國提供古巴所需物資及能源，卻在古巴獨立之後，卡斯楚成立新政府新政策，讓美國意識到利益衝突時，美國宣佈與古巴斷交。對古巴進行經濟封鎖，繼絕重要能源之路。古巴轉向依靠蘇聯進口石油，來減低美國禁運對古巴的影響。不幸地，在１９９０年蘇聯瓦解，再度面臨經濟和能源危機，使得推動國內社會經發展成為一項艱難的任務。為了強化危機管理能力以提升國際競爭力，上任新政府，切格瓦拉被命為高級官員，在國內推動醫療改革之下成為醫療幕後推手，殊不知，醫療乃成為古巴在外交政策上的手腕。1960年智利大地震首次派遣醫療團隊，奠定古巴醫療援外的經驗。即使缺乏美蘇援外古巴，古巴仍然堅持推

動醫療外交策略。對於過去印象中古巴從「革命輸出」改為「醫生輸出」。本論文將以古巴醫療外交為主軸，從「新現實主義」觀點去分析古巴醫療外交的發展，古巴將外交重心拉回到第三世界的國家為主。在醫療外交計劃分為長短期策略，對短期而言，基於人道主義精神之下，提供救災援助工作；長期計劃則是提供培育醫療人員、推動公共衛生重新建設與改善。本論文亦分析古巴透過醫療外交的「軟實力」，成功換取古巴所需資源，藉由古巴作為全球之借鏡，醫療外交確實可以改善全人類的健康問題以及緩解國際關係之問題。