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線蟲捕捉菌Arthrobotrysoligospora扮演重複寄生菌之胞壁分解酵素及形態分化探討
為了解決m2r fr-1 ptt 的問題,作者鍾嘉綾 這樣論述:
中文摘要 Arthrobotrys oligospora係線蟲捕捉菌,能產生三度空間分布的粘著性捕捉網捕捉線蟲,以往曾被嘗試作為根瘤線蟲的生物防治劑。A. oligospora直到1978年才被發現,除了能藉著捕捉線蟲來汲取環境中缺乏的養分外,同時也能對特定種類的真菌,如Rhizoctonia solani, Geotrichopsis mycoparasitica, Matruchotia variaus進行超寄生 (mycoparasitism)。A. oligospora會朝真菌寄主新生菌絲出現的方向延伸出許多短側枝,碰觸並纏繞寄主,促使寄主菌絲縊縮、胞壁溶解、胞質
滲漏,再吸收利用滲漏之養分。A. oligospora如何被誘導產生特化之線圈狀菌絲?又此特化之線圈狀菌絲會產生那些胞壁分解酵素,以溶蝕胞壁並進而消化吸收滲出的胞質?此等疑問則仍待釐清。 以基礎培養基 (basal medium) 添加滅過菌的R. solani菌絲體作為液體培養基培養A. oligospora,試圖誘導A. oligospora產生用來溶解R. solani 胞壁的酵素。活體 (in vivo) 檢測顯示A. oligospora能被誘導分泌胞外酵素,並能溶解R. solani胞壁,使其釋放出原生質體。在A. oligospora、R. solani滅過菌
的菌絲體混合液體培養 (AxR) 過程中,A. oligospora被誘導產生更多量、活性更強之β-1,3-glucanase、protease、N-acetyl-glucosaminase (NAGase)、chitobiosidase、endochitinase等酵素,而cellulase活性則一直相當低。進一步對A. oligospora胞外酵素之粗濃縮液進行SDS-PAGE、native-PAGE及β-1,3-glucanase、chitinase、protease活性電泳,發現protease質量與不添加R. solani菌絲體相比較則明顯增加,而glucanase、chitinas
e則只有量的增加。 應用各種帶螢光之基質為受體,如Calcofluor White M2R New、Rhodamine B、BODIPY FL casein、BODIPY FL dextran、resorufin N-acetyl-β-D-glucosaminase、resorufin-β-D-glucopyranoside、Mu-NAG、Mu-β-D- N, N''-diacetylchitobiose、Mu-β-D- N, N'', N"-triacetylchitotriose、ELF-lipase, esterase, phosphatase substrate、F
ITC-lectins (FITC-ConA, WGA, SBA, DBA, UEA, PHA),進行微量分析A. oligospora寄生纏繞R. solani相互作用界面之胞壁分解酵素之質量與作用位置,結果顯示,兩者之界面,會有protease、α-1,6-glucanase、β-glucosidase、β-glucanase、chitinase ( NAGase, chitobiosidase, endochitinase)、lipase、esterase、phosphatase等酵素活性表現,及fucose、glucose、mannose、N-acetyl-glucosamine、N-
acetyl-galactosamin、oligosaccharide殘基之存在。 環境條件常會影響超寄生現象的發生,一般而言,當A. oligospora生長良好時,菌絲分支增加,纏繞機率便隨之提昇;營養方面,當碳氮比 (glucose-NH4NO3) 為50:1時,纏繞比率最高,在所有受試氮素源中,有機、無機氮素源分別會加強或抑制A. oligospora的生長分支及超寄生能力,而一般生物最容易利用的碳素源 - glucose,雖能促進菌絲分支,卻對特化線圈狀菌絲的形成有顯著的迴饋抑制作用。 以往研究顯示真菌的形態分化通常受物理因子 (如:葉表氣孔構
造、基質硬表…)、化學因子 (如:salt, volatile compound, peptide, cutin…) 之調控。但因A. oligospora無法纏繞已死亡的R. solani菌絲,物理因子可能非主要調控因素;至於化學因子方面,目前結果顯示,培養基若添加不同氨基酸,A. oligospora纏繞R. solani的比率及環繞數目即有所改變;而測試的數種離子,在25 mM較低濃度下,除Na+、K+、I-、Cl- 對超寄生現象影響不大之外,其餘的Cs+、Mg2+、Ca2+、Mn2+、HSO3-、CO3-2均或多或少抑制線圈狀菌絲之產生,但離子濃度增加到100 mM時,線圈狀纏繞比率普
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