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第十介白質提升羊水幹細胞改善GvHD之效用評估

為了解決kuga四驅模式的問題，作者姜文婷 這樣論述：

宿主排斥(rejection)或移植物對抗宿主疾病(graft-versus-host disease；GvHD)是臨床進行異體造血幹細胞移植過程中主要常見的問題。近來研究結果顯示，進行造血幹細胞移植時，合併注入成體幹細胞具有減輕GvHD反應以及提高造血幹細胞植入率的效用。實驗室先前的動物實驗證明來自羊水的(AFSC)與胎盤的(PDSC)成體幹細胞均可提升捐贈造血幹細胞植入的效率，其中PDSC也具有減緩急性GvHD的效果，然而AFSC細胞並未能如預期在活體內有減緩急性GvHD的排斥現象。另外，現今有關成體幹細胞為何可提升骨髓移植植入率的機制並不清楚。IL-10是一種免疫抑制細胞激素，可抑制第

一型輔助T細胞(Th1)表現的活性，因此，本實驗室利用慢病毒作載體將IL-10的基因轉染至羊水幹細胞(AF)中，期望經轉染IL-10後的AFSC細胞能提升其免疫抑制的活性並於活體上達到減緩GvHD排斥反應的療效，針對以上的論點，本研究的目的有二：[1]探討羊水及胎盤幹細胞增加骨髓移植效率的相關分子機制；[2]評估轉染IL-10基因的羊水幹細胞對GvHD的抑制效用。 在評估羊水或胎盤幹細胞調控造血幹細胞分子機制的實驗結果顯示，(1)以Flow cytometry分析其幹細胞表面分子的表現，發現AFSC和PDSC均能表現不等程度的黏附型表面分子CD29、CD44、CD106，但均不會表現CD

49a分子；(2)以colony-forming unit(CFU)方法發現羊水及胎盤幹細胞可以產生可溶性因子促進造血幹細胞增生或分化，收集CFU培養中的colony 細胞，以RT-PCR方法評估發現，AFSC和PDSC均可促使造血幹細胞中造血過程所需之轉錄因子Cdx4基因的表現；(3)以RT-PCR方法檢測發現，AFSC細胞會表現: SDF-1、IL-6、IL-11、OSM、G-CSF、M-CSF、GM-CSF等mRNA，PDSC細胞會表現：SDF-1、IL-11、M-CSF、GM-CSF等造血相關調節因子的mRNA，但兩者均不會表現TPO mRNA。 在評估轉染IL-10的AFSC(

AF/IL-10)是否能夠減緩GvHD反應的實驗結果顯示，(1)以RT-PCR與ELISA方法檢測IL-10基因轉染後的羊水幹細胞顯示AF/IL-10細胞可表現IL-10基因並且可分泌IL-10細胞激素；(2)利用mixed lymphocyte reaction(MLR)的方式確認經轉染IL-10後的AFSC細胞在高密度作用下，具有提升抑制異體T細胞增生的活性；(3)轉染IL-10後並不影響AFSC細胞表面上CD29、CD49a、CD44、CD106、MHC I和MHC II等分子的表現量，並且分化證明AF/IL-10細胞仍具有分化成脂肪細胞的能力，但分化能力會降低；(4)將AF/IL-10

細胞和C57BL/6J小鼠的造血幹細胞一起植入BABL/c 的GvHD小鼠體內進行抗GvHD的驗証，依據評估GvHD score、骨髓接受者存活率、捐贈細胞植入狀況與血液細胞族群恢復程度等實驗結果發現，AF轉染IL-10後可提升其在活體中減緩GvHD排斥反應的療效。