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建立B型肝炎病毒基因轉殖鼠模型及發展以介白素-15為基礎的新穎腫瘤基因治療

為了解決arai tour cross 3重量的問題，作者張家鳴 這樣論述：

B型肝炎病毒感染是人類的主要傳染疾病並且會造成急性以及慢性的肝臟疾病以及肝細胞癌。全世界目前約有三億五千萬人口正遭受到B型肝炎病毒的感染。然而缺乏合適的B型肝炎病毒感染細胞培養或小動物模型，發展新型慢性B型肝炎病毒感染的治療策略也受到影響。因此我們製作了B型肝炎基因轉殖鼠(ICR/HBV)，在這個基因轉殖鼠的肝臟以及腎臟中可以觀察到大量的B型肝炎病毒DNA複製中間物以及病毒RNA的表現。小鼠血清中也可以測得到高量的HBsAg以及HBeAg。利用Q-PCR定量在血清中的平均HBV DNA濃度，在公鼠大約4.45e+08 copies/ml，而母鼠則略低約在1.85e+08 copies/ml，

這樣的濃度和B型肝炎病毒感染的病人血清中病毒濃度(3.3e+08 copies/ml)相當。更重要地，這些基因轉殖鼠顯示出一些B型肝炎病毒有關的肝臟病理現象：包括漸進式的肝臟傷害並且逐步生成肝細胞的腺腫瘤。為了評估B型肝炎病毒基因轉殖鼠是否可以用來檢測新型的抗B型肝炎病毒藥物治療效果，這些小鼠連續21天腹腔注射10 mg/kg/day的adefovir。Adefovir是目前臨床治療慢性B型肝炎病毒感染所使用的核苷酸類似物，實驗結果顯示adefovir可以顯著的降低血清中的B型肝炎病毒DNA，從3e+08 copies/ml降到低於1e+05 copies/ml (>2300倍抑制)。肝臟B型

肝炎病毒複製DNA在經過21天治療後同樣也抑制到無法偵測的程度，然而肝臟B型肝炎病毒RNA並沒有明顯受到影響。因此ICR/HBV基因轉殖鼠不但有助於瞭解病毒對肝臟的影響，並導致腫瘤發生的原因，並且十分適合用來評估新型有潛力的抗B型肝炎病毒的試劑。為了建立B型肝炎病毒感染細胞培養模型，我們構築攜帶HBV1.3基因體的腺病毒載體(Ad/HBV)，Ad/HBV可以有效的感染了HepG2肝癌細胞株，並且啟動了B型肝炎的病毒複製以及病毒基因表現，生產病毒的HBsAg與HBeAg釋放到細胞培養液中。這個方法可以用來探討野生型與突變型的B型肝炎病毒的致病機轉以及病毒與宿主間的作用，以及in vitro篩選新

型的抗病毒藥物。在本論文的第二部份則是在於應用介白素-15新型基因療法來治療肝細胞癌。肝細胞癌是全世界常見的癌症，現今的治療方式雖然可以控制某種程度的癌細胞生長，但是卻不易治療轉移性的肝癌以及避免腫瘤的再復發，因此仍然需要一種很有效的方法來治療肝細胞癌，由於肝臟中富含了許多不同族群的淋巴球，並且這些細胞在腫瘤的免疫監視機制上扮演很重要的角色。因此我們提出一個假設，利用介白素-15來刺激活化增生這些特定族群的肝臟淋巴球例如NK、NKT以及記憶型CD8+ T細胞，或許可以提供另一種治療肝細胞癌的策略。我們利用腺相關病毒血清型8號(AAV8)攜帶介白素-15超級促效劑(IL-15-IL-15RaS)

來達到在肝臟環境中局部表達高濃度的IL-15-IL-15RaS。我們發現單獨一劑的AAV8/IL-15-IL-15RaS可以顯著的增加肝臟單核球的細胞數，這些細胞主要是NK細胞，並且持續至少21天之久。此外AAV8/IL-15-IL-15RaS具有潛力的抗癌活性可以抑制肝轉移的BNL細胞在肝臟中生長，並且延長小鼠的存活天數。此外IL-15-IL-15RaS可以增加肝臟NK細胞的毒殺活性，並且利用抗體清除小鼠NK細胞後其治療效果便消失，因此IL-15-IL-15RaS的抗腫瘤的機制主要是NK細胞而非CD8+或是CD4+ T細胞。更重要的是在整個AAV8/IL-15-IL-15RaS的治療過程中，

並不會造成明顯的肝臟毒性。我們的結果顯示AAV8/IL-15-IL-15RaS或許可以提共另一個有效的治療方式來治療肝細胞癌。