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高靈敏度的一維繞射感測器應用於反射雷射系統進行現場快速無標記鼠疫桿菌檢測

為了解決Smart 451 mhd的問題，作者林豐平 這樣論述：

本研究對於疑似新興傳染病、生物病原恐怖攻擊或感染急症之快速檢測，所進行之技術開發與應用研究，由於高傳染病的感染診斷一般需要將病患檢體送至微生物實驗室進行培養與核酸檢測，雖然市面上有部分快篩試劑產品，檢測靈敏度不足始終是最大的問題，因此開發現場可執行之高傳染性病原快速且靈敏度高的檢測方法是相當重要且迫切需要，可即時為患者提供適切的治療，並立即採取必要的感染管控措施，避免疫情擴散。我們建置一個簡單的方法可在採樣現場直接快速檢測血液檢體當中的病原，以解決目前現行檢測方法需要將檢體送入實驗室進行微生物培養與分析的不便性，首先利用鼠疫桿菌(Yersinia pestis)作為偵測標的物以確認方法的可行

性，發現此法對於偵測鼠疫桿菌而言呈現高靈敏度，檢測極限可達100 CFU/mL，線性範圍很廣在102~107 CFU/mL之間。在此研究中我們採用自製的一維繞射感測器(one-dimensional diffraction grating sensor，簡稱ODGs)，即線型生物矽晶片，並以聚多甲基丙烯酸（PMAA）刷的頂端連接抗體，抗體可專一性地抓取目標病原體，不會抓取其他細胞或病原體，操作方式是將血液檢體滴加到一維繞射感測器上，將雷射光以45°的角度射入，並測量其反射繞射的強度，當晶片上有特定病原體存在時，反射繞射的強度會降低。我們發現當雷射光照射入晶片，且雷射光方向與溝槽平行，使雷射投影

到晶片平面上時，在這樣的配置下偵測靈敏度更高。另外，2D和3D反射繞射的特點則是繞射階數的角度和振幅表現出對稱和不對稱的特性，這取決於晶片的方向，因此，可依雷射強度的變化作為特定病原體存在的指標。使用一維繞射感測器偵測微生物病原的優勢是僅需病原的專一性抗體，無需搭配任何螢光標記，儀器可輕易攜帶到實驗室以外的場域進行分析，且整個操作反應時間小於1小時。另外，我們製作具有線陣列的一維繞射光柵晶片，透過乙基（二甲氨基丙基）碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)即EDC/NHS反應，將明膠(gelatin)選擇性地固定在具有2微米解析度的光刻模板溝槽陣列的醯胺基改質的基底上。已固定明膠的線陣

列經過溴化後產生可用於原子轉移自由基聚合(ATRP)的大分子起始劑，再從大分子起始劑這一層開始接枝Poly(methacrylic acid) (PMAA)形成高分子刷線陣列。在接枝PMAA的不同聚合時間中，以雷射光束系統分析晶片，沿橫向磁極化(TE)和逆向電極化(TM) 45°分析觀察繞射效應的光學特徵，我們發現PMAA線陣列矽晶片隨著時間PMAA生長而增加了線刷的高度和寬度，導致反射繞射強度出現變化。通過用胰蛋白酶(trypsin)分解明膠，將不同接枝聚合時間下的PMAA刷從晶片基質上裂解下來，並通過膠體滲透層析儀分析它們的分子量。發現當PMAA分子刷的分子量在135到1475 kDa範圍

下，PMAA刷的分子量與繞射強度的變化程度呈現線性關係，且相關係數高。使用反射繞射強度判斷聚合物刷分子量的測定方式，無需斷裂聚合物刷，提供可即時監測分子刷生長的簡單方法。

14-脫氧-11,12-雙脫氫穿心蓮內酯改善肝纖維化之LX-2人類肝臟星狀細胞研究

為了解決Smart 451 mhd的問題，作者王譯梁 這樣論述：

中文摘要 IAbstract III目錄 V圖目錄 IX表目錄 XI第一章、前言 1第二章、文獻探討 22.1非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD) 22.1.1 NAFLD組織學特徵及發病率 22.1.2NASH流行病學特徵 32.1.3 NASH發病的原因 52.1.4 NASH及肝纖維化診斷和治療 62.2肝臟 82.2.1肝臟結構 82.2.2肝臟細胞類型和組成 112.3肝纖維化 132.3.1肝纖維化基本介紹 132.3.2ECM來源：肝星狀細胞的重要性 152.3.3HSCs 162.3.4HSCs激活的起始、永存和消

退期 172.3.5MMPs和TIMPs在肝纖維化中的角色 202.3.6細胞激素在肝纖維化中的作用 252.4 TGF-β誘發纖維化之訊號路徑 322.4.1 SMAD依賴性路徑 332.4.2SMAD非依賴性路徑 352.4.3絲裂原活化蛋白激酶 (MAPKs) 352.4.4NF-κB 422.5 NAFL到纖維化的發展 432.5.1 NAFL到纖維化的介紹 432.5.2肝臟中脂肪酸的來源 442.5.3脂毒性(Lipotoxicity) 452.6內質網壓力 482.6.1內質網壓力簡介 482.6.2 未摺疊蛋白質反應(UPR) 482.6.3內質網壓力與細胞死亡 512.6.4

內質網壓力與發炎反應 542.6.5內質網壓力與肝纖維化 572.7穿心蓮 612.7.1穿心蓮的活性物質 632.7.2穿心蓮內酯(AND) 642.7.3 14-脫氧-11,12-雙脫氫穿心蓮內酯 (deAND) 64第三章、研究動機 77第四章、材料與方法 784.1研究架構 784.1.1 deAND萃取與純化流程 784.1.2 LX-2細胞實驗架構 794.2實驗材料 804.3實驗方法 874.3.1 deAND萃取與純化 874.3.2 Recombinant Human TGF-β1配製 1044.3.3 LX-2細胞株培養 1054.3.4棕櫚酸(Palmitic ac

id)製備 1064.3.5細胞存活率分析(MTS assay) 1074.3.6蛋白質分析與西方點墨法(Western blotting) 1084.3.7即時聚合酶鏈鎖反應(quantitative real-time polymerase chain reaction, qPCR) 1144.4統計分析 119第五章、結果 1205.1 穿心蓮萃取、分離及純化後所得之deAND結晶產物 1205.2 不同濃度deAND處理LX-2 肝星狀細胞對細胞存活率的影響 1205.3 deAND對TGF-β1活化LX-2肝星狀細胞之纖維化相關蛋白質及mRNA表現的影響 1205.4 deAND對

TGF-β1活化LX-2肝星狀細胞之MMPs/TIMPs相關mRNA表現的影響 1215.5 deAND對TGF-β1活化LX-2肝星狀細胞之趨化因子/前細胞發炎激素/促纖維化因子相關mRNA表現的影響 1225.6 deAND對TGF-β1誘導LX-2肝星狀細胞之SMAD依賴性(SMAD-dependent)及SMAD非依賴性(SMAD-independent pathways)路徑相關蛋白質表現的影響 1235.7 PA 誘發LX-2 肝星狀細胞之內質網壓力、發炎 1245.8 PA誘發LX-2 肝星狀細胞之纖維化 1255.9 deAND對PA誘發LX-2肝星狀細胞之內質網壓力、發炎及

纖維化的影響 125第六章、討論 146第七章、結論 153第八章、參考文獻 155