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台中地區小型哺乳類動物鉤端螺旋體感染調查暨應用恆溫式圈環型核酸增幅法進行鉤端螺旋體lipL32基因偵測

為了解決SARASA R PTT的問題，作者吳尚翰 這樣論述：

鉤端螺旋體為重要之人畜共通傳染病，致病性鉤端螺旋體血清型繁雜，感染後的症狀可由類流感症狀到嚴重的肝腎衰竭皆有可能，甚至出現高致死率的肺臟出血。本病主要帶菌貯主為囓齒類動物，且依據不同鼠種於當地的分佈，也會使得地區流行的血清型有所不同。lipL32基因可用以區別腐生型與致病型菌種，近來恆溫式圈環型核酸增幅法(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的研發大幅縮短基因偵測所需的時間，且只需恆溫水浴槽即可完成，因此可應用於鉤端螺旋體診斷，以取代傳統的聚合酶鏈反應方法。本次調查的目標為台中地區小型哺乳類動物的血清盛行率與鉤端螺旋體帶原率，同時佐以恆溫

式圈環型核酸增幅法進行鉤端螺旋體lipL32基因的偵測。採樣時間自民國95年2月至96年2月。於台中縣市地區共計採得148隻動物檢體。聚合酶鏈反應結果顯示13個樣本為鉤端螺旋體陽性。同時分離到10株來自溝鼠腎臟的鉤端螺旋體與1株世界首次分離於錢鼠腎臟的鉤端螺旋體。進一步將增幅後的flaB基因片段，進行限制酶切割片段分析，顯示其中17種屬於Leptospira interrogans，另有4種無法依切割後的片段分類，比對基因序列結果顯示各樣本與Leptospira interrogans Copehangeni M20的相似程度為98%~100%。將flaB基因序列及16S rRNA基因序列，進

行親緣樹狀圖演化分析。結果顯示所有陽性樣本與分離株不僅屬於致病型鉤端螺旋體，且近似於Leptospira interrogans。在血清抗體盛行率方面，以顯微凝集試驗(Microscopic agglutination test, MAT)抗體力價大於100倍為陽性標準，共有22.7% (33/148)的樣本呈現血清陽性。其中24個樣本來自溝鼠，顯著高於其他族群。以上資料顯示台中地區小型哺乳類動物族群有類似Leptospira interrogans的鉤端螺旋體存在，且溝鼠為主要的感染族群。此外，本次研究中設計六套引子以供兩組恆溫式圈環型核酸增幅法進行鉤端螺旋體lipL32基因偵測。實驗中共測

試了36種鉤端螺旋體血清型與11株分離株，結果顯示致病型菌種皆可以此法順利增幅，然腐生型則為陰性反應。與傳統聚合酶鏈反應比較其靈敏度，兩者偵測極限皆為101 bacteria / μl，然而LAMP實驗流程僅需65℃半小時至一小時與80℃, 10分鐘即可完成。且搭配RFLP方式可確定增幅產物是否正確。因此可大幅縮短金錢耗損與提升操作效率，故未來可應用於一般實驗室診斷與大規模流行病學調查。