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細菌包涵體純化與復性之製程開發

為了解決MARCH K13 FH的問題，作者卓昱岑 這樣論述：

本研究以大腸桿菌生產豬生殖與呼吸綜合症(PRRS)病毒抗原，綠膿桿菌 (Pseudomonas aeruginosa) 外毒素基因分別與第一型及第二型PRRS病毒之膜蛋白與殼蛋白基因接合，轉殖至大腸桿菌並誘導基因表現目標蛋白質，研究結果發現重組蛋白無法為可溶型態，是以包涵體(inclusion body)狀態存在細胞質中。在量產製程用100 L醱酵槽培養，菌體破碎後純化包涵體儲存後以尿素溶解成變性蛋白質，再經復性處理即為豬生殖與呼吸綜合症抗原，然而包涵體將因產量與業務需求量不同而使之放置儲存，但是在溶解過程中易因儲存時間長而造成溶解不易之現象，故本研究係利用無毒性的原料及容易操作的方式改善包

涵體不均勻以及黏稠不易分散的現象，並進行後續溶解試驗，藉以了解蛋白質是否會因不同溫度而降解，依據試驗結果使用水及酒精將包涵體原有鹽類及水分清除後，包涵體由塊狀甚至黏稠狀變為粉狀，而不同溫度儲存之包涵體經尿素溶解後儲存溫度低的包涵體所獲得之抗原量較多，另經低溫長時間儲存後之包涵體其所得抗原量較短時間儲存之包涵體少，另進行四種蛋白質分別復性及混合後復性用經粒徑分析並無差異，但在動物體上是否無差異，仍需進行動物試驗才能確定。