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美人蝦(Stenopus hispidus)胚胎低溫保存校正基因之分析研究

為了解決Honeywell 5250的問題，作者胡瓊止 這樣論述：

在蝦類低溫保存時，可能會使內部細胞受損形成低溫傷害，甚至導致基因改變；蝦類低溫相關基因表現極為稀少，然而探討基因表現則需具備穩定之校正基因，以作為基因正規化之標準。本研究主要探討五種常見之校正基因：18S ribosomal RNA(18S rRNA)、sodium-potassium(ATPase(NAK))、histone3、beta-actin(β-actin)、Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase(gapdh)，於美人蝦胚胎低溫處理之穩定性。將美人蝦三個胚期之胚胎取出後放置降溫型乾浴器以低溫5°C暴露4、8、16及32小時，對照室溫26°C

，將樣本進行RNA萃取、cDNA合成以及qPCR分析。本研究利用GeNorm、NormFinder與Bestkeeper軟體進行基因基因穩定性的分析。GeNorm分析顯示總體樣本、不同低溫處理時間點與三個胚期最穩定之兩者基因為histone 3與18S rRNA；18S rRNA由NormFinder分析則是低溫處理4、16、32小時、眼形成期以及胚胎孵化前期是最穩定之校正基因；不同於前者兩個結果，Bestkeeper分析最佳穩定之校正基因為gapdh，其次為β-actin。校正基因具備不受實驗條件變因影響之特性，常被用以作為qPCR分析之內部對照基因，目前甲殼類低溫基因表現相關研究仍相當缺乏

，於美人蝦之部分更甚少，本研究結果認為histone3以及18S rRNA可做為美人蝦胚胎低溫相關基因研究中qPCR內部正規化最穩定之校正基因，本研究亦首次探討美人蝦低溫保存校正基因，並建立初步研究階段，期望可提供日後相關研究之參考依據。