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綠竹筍殼幾丁質酶異構酶之純化與性質研究

為了解決GLC 300 AMG的問題，作者黃淳蔚 這樣論述：

綠竹筍（Bambusa oldhamii）殼所含幾丁質酶經由硫酸銨 (80%飽和度) 劃分、DEAE-Sephacel離子交換層析、Polybuffer exchanger PBE-94等電焦集層析及HiLoad Superdex 75 HR膠體過濾層析等步驟純化可得G1-A、G2及G3三種幾丁質酶異構酶，其中G1-A可水解幾丁質及人工合成基質4-methylumbelliferyl N,N’,N’’-triacetyl-β-chitotrioside (4-MU-β-GlcNAc3)，異構酶G2可水解人工合成基質4-MU-β-GlcNAc3但幾乎無法水解幾丁質，而異構酶G3可水解幾丁質但幾

乎無法水解人工合成基質4-MU-β-GlcNAc3，SDS-PAGE電泳分析顯示三種異構酶均未達均質純度。以Hiprep Sephacryl S-100 HR 膠體過濾層析測得異構酶G1-A尚含有兩種異構酶，其分子量為22 kDa和18 kDa，異構酶G2之分子量為24 kDa，而異構酶G3之分子量則為22 kDa；以SDS-PAGE電泳及幾丁質酶活性染色測得異構酶G1-A之分子量為18 kDa，異構酶G3之分子量為25 kDa，而異構酶G2無法水解幾丁質 (EG-chitin) 未顯示活性帶，此結果顯示異構酶G1-A及G3均屬單元體酵素。SDS-PAGE電泳及幾丁聚醣酶活性染色結果顯示，三種

幾丁質酶異構酶另含有一至數種幾丁聚醣酶異構酶；等電焦集電泳分析顯示異構酶G1-A及 G2含有若干不同等電點之蛋白質，而異構酶G3則主要含有等電點3.69左右之蛋白質；異構酶G3於60℃保溫120分鐘幾無活性損失，熱穩定性頗佳，其水解EG-chitin基質最適pH值為4，最適溫度為70℃，Km 為0.87 mg/mL，Vmax為10.24 μmolGlcNAc min-1mg-1，而活化能為13.1 kcal/mole；其水解CM-chitin基質最適pH值為3及9，最適溫度為70℃，Km 為1.65 mg/mL，Vmax為24.75 μmolGlcNAc min-1mg-1，而活化能為12.5

kcal/mole。基質專一性分析顯示G3異構酶可水解水溶性幾丁質、不溶性幾丁質及幾丁聚醣，其水解幾丁聚醣活性以對50 ~ 80 % 去乙醯度幾丁聚醣具有較高活性，而具水解幾丁聚醣酶活性之原因可能是含有幾丁聚醣酶異構酶所致。