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慈濟大學 微生物及免疫學碩士班 林光慧所指導 謝明娟的 鮑氏不動桿菌含鐵醇脫氫酶在醇類代謝及抵抗壓力中扮演的角色 （2018），提出Astone KA21 PTT關鍵因素是什麼，來自於鮑氏不動桿菌、含鐵醇脫氫酶、醇類代謝、抵抗壓力。
而第二篇論文國立臺灣大學 流行病學研究所 陳秀熙所指導 廖朝聖的 小型肝細胞癌經皮酒精注射治療之臨床監視及決策分析 （2003），提出因為有 Small hepatocellular carcinoma、Percutaneous ethanol injection、Weibull model、Cost effectiveness analysis、Markov Model的重點而找出了 Astone KA21 PTT的解答。
鮑氏不動桿菌含鐵醇脫氫酶在醇類代謝及抵抗壓力中扮演的角色
為了解決Astone KA21 PTT 的問題，作者謝明娟 這樣論述：
目錄Abstract I中文摘要 III前言 1院內感染 (nosocomial infection) 1鮑氏不動桿菌 (Acinetobacter baumannii) 1乙醇 (ethanol) 2醇脫氫酶 (alcohol dehydrogenase, Adh) 3乙醇造成壓力 4活性氧化物質 (reactive oxygen species, ROS) 4輔酶NAD(P)H 5研究源起與目的 6材料與方法 7一、材料 71. 菌種及培養環境 72. 大蠟蛾 (Galleria mellonella)培養環境及生長史 73. 質體 74. 引子 95.
藥品及試劑 96. 儀器及器材 9二、方法 101. 純化鮑氏不動桿菌染色體 102. DNA聚合酶連鎖反應 (DNA polymerase chain reaction, PCR) 103. 純化質體 114. 酒精沉澱 115. 限制酶作用 (restriction enzyme digestion) 126. 黏合作用 (ligation) 127. 勝任細胞 (competent cell)製作 128. 轉型作用 (transformation) 139. 質體快篩 (quick screening) 1310. 誘導蛋白質表現 (induction)及製備
純化蛋白質樣品 1311. 破碎純化蛋白質樣品 1412. 以鎳離子親和性管柱層析純化蛋白質 1413. 蛋白質濃縮 1514. 蛋白質定量 1515. 蛋白質電泳 (SDS-PAGE) 1616. 醇脫氫酶活性測試 (Adh assay) 1617. Gibson assembly黏合作用 1718. 接合生殖 (conjugation) 1719. 無標記基因突變法 (markerless mutagenesis) 1820. 菌落聚合酶鏈鎖反應 (colony PCR) 1821. 鮑氏不動桿菌生長曲線 1922. 電穿孔勝任細胞製備 1923. 電穿孔 (el
ectroporation) 2024. 螢光影像 2025. 壓力處理存活率測試 2026. NADH/NAD+比例測定 2127. RNA樣品製備 2128. RNA萃取 2229. 反轉錄聚合酶鏈鎖反應 (reverse transcription PCR, RT-PCR) 2230. 定量聚合酶鏈鎖反應 (quantitative reverse transcription PCR, qRT-PCR) 2331. 大蠟蛾感染測試 23結果 23一、鮑氏不動桿菌中含有三個含鐵醇脫氫酶 241. 鮑氏不動桿菌有七個醇脫氫酶 242. Adh3, Adh4, Adh6
為含鐵的醇脫氫酶 243. 醇脫氫酶演化樹狀圖 244. 常見細菌中醇脫氫酶數量與基因體大小正相關 25二、含鐵醇脫氫酶的生化特性 261. 確認adh3, adh4, adh6表現株 262. 純化含鐵醇脫氫酶Adh3, Adh4, Adh6 283. Adh3對於1-丁醇親和性較高 284. Adh4對於乙醇有高親和性且有效代謝乙醇 285. Adh6酵素活性低，對於1-丁醇較有親和性 29三、含鐵醇脫氫酶參與醇類代謝 301. 確認adh3, adh4, adh6突變株 302. adh3, adh4, adh6基因不會影響細菌基本生長 303. Adh4對於鮑氏
不動桿菌中乙醇代謝最為重要 304. Adh4對於鮑氏不動桿菌中1-丙醇代謝最重要，Adh3參與1-丙醇代謝 315. Adh3及Adh4影響鮑氏不動桿菌中1-丁醇代謝 316. Adh6不會影響細菌中醇類代謝 327. 乙醇誘導adh4基因表現 32四、含鐵醇脫氫酶增加細菌對於環境壓力的耐受度但不直接影響細菌中NADH/NAD+的比例 331. 建構螢光表現質體pWH1266_peredox-mCherry 332. 確認鮑氏不動桿菌螢光表現菌株 343. 無機氧化壓力不會增加鮑氏不動桿菌綠色螢光表現 344. 含鐵醇脫氫酶不會藉由調節NADH/NAD+比例以增加鮑氏不動桿
菌對於無機氧化壓力的耐受度 345. 含鐵醇脫氫酶不會藉由調節NADH/NAD+比例以增加鮑氏不動桿菌對於有機氧化壓力的耐受度 366. 含鐵醇脫氫酶不會藉由NADH/NAD+比例以增加鮑氏不動桿菌對於滲透壓壓力的耐受度 377.含鐵醇脫氫酶不直接影響細菌對於熱壓力的耐受度及細菌中NADH/NAD+的比例 38五、含鐵醇脫氫酶Adh6增加細菌毒力，Adh4與細菌毒力無關 381. Adh3與Adh6增加細菌的毒力能力 382. 鮑氏不動桿菌感染後的大蠟蛾幼蟲重量逐漸下降 393. Adh4不會影響細菌對於大蠟蛾幼蟲的黑化反應 39討論 41一、不同細菌間含鐵醇脫氫酶演
化關係 41二、其他細菌中醇脫氫酶在醇類代謝的功能及活性 42三、細菌中哪些蛋白質直接或間接影響體內NADH/NAD+的比例 441. NAD激酶與NADP磷酸酶 442. NAD(P)H脫氫酶 453. 代謝作用的酵素 47四、細菌中醇脫氫酶及其他酵素與環境壓力之間的關係 47五、鮑氏不動桿菌感染的模式生物 48六、鮑氏不動桿菌中含鐵醇脫氫酶在醇類代謝及抵抗壓力中扮演的角色 51表一、醇脫氫酶的類別 52表二、鮑氏不動桿菌中的醇脫氫酶 53表三、本論文中使用的菌種 54表四、本論文中使用的質體 56表五、本論文中使用的引子 58表六、Adh3以不同受質 (乙醇、1
-丙醇及1-丁醇)在pH=10.8的Carbonate-bicarbonate緩衝溶液所求出的Vmax, KM, kcat, kcat/KM 62表七、Adh4以不同受質 (乙醇、1-丙醇及1-丁醇)在pH=10.1的Carbonate-bicarbonate緩衝溶液所求出的Vmax, KM, kcat, kcat/KM 63表八、Adh6以不同受質 (乙醇、1-丙醇及1-丁醇)在pH=10.1的Carbonate-bicarbonate緩衝溶液所求出的Vmax, KM, kcat, kcat/KM 64表九、其他細菌中醇脫氫酶在醇類代謝的功能及活性 65表十、細菌中直接或間接影響體內
NADH/NAD+比例的酵素 67圖一、鮑氏不動桿菌中七個醇脫氫酶演化樹狀圖。 70圖二、鮑氏不動桿菌中含鐵醇脫氫酶胺基酸比對。 71圖三、醇脫氫酶演化樹。 72圖四、細菌中醇脫氫酶總數量與基因體大小的相關性。 74圖五、確認adh3表現菌株。 75圖六、確認adh4表現菌株。 76圖七、確認adh6表現菌株。 77圖八、以12% SDS-PAGE檢視是否成功純化出的Adh3、Adh4、Adh6。 78圖九、以不同pH值的緩衝溶液測試Adh3的酵素活性。 79圖十、以Michaelis-Menten公式分析Adh3使用不同受質的酵素動力學。 80圖十一、以不同pH值的緩衝
溶液測試Adh4的酵素活性。 82圖十二、以不同反應溫度測試Adh4的酵素活性。 83圖十三、以Michaelis-Menten公式分析Adh4使用不同受質的酵素動力學。 84圖十四、以不同pH的緩衝溶液測試Adh6活性。 86圖十五、以Michaelis-Menten公式分析Adh6使用不同受質的酵素動力學。 87圖十六、確認鮑氏不動桿菌adh突變株之聚合酶鏈鎖反應結果。 89圖十七、鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株在LB培養基之生長曲線。 90圖十八、鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株以1%乙醇為單一碳源之生長曲線。 91圖十九、鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株以1%丙醇為單
一碳源之生長曲線。 92圖二十、鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株以1%丁醇為單一碳源之生長曲線。 93圖二十一、以即時定量聚合酶鏈鎖反應分析鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株中各個adh基因的表現量。 94圖二十二、建構螢光表現質體 96圖二十三、確認含有螢光表現質體的各個菌株。 98圖二十四、鮑氏不動桿菌在H2O2氧化壓力下的螢光影像 100圖二十五、無機氧化壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株的存活率。 102圖二十六、無機氧化壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株中NADH/NAD+的比例。 103圖二十七、以即時定量聚合酶鏈鎖反應分析鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株經5
mM H2O2處理20分鐘前後各個adh基因的表現量。 104圖二十八、有機氧化壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株的存活率。 106圖二十九、有機氧化壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株中NADH/NAD+的比例。 107圖三十、以即時定量聚合酶鏈鎖反應分析鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株經300 M tBHP處理20分鐘前後各個adh基因的表現量。 108圖三十一、滲透壓壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株的存活率。 110圖三十二、滲透壓壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株中NADH/NAD+的比例。 111圖三十三、高溫壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株的存
活率。 112圖三十四、熱壓力下鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株中NADH/NAD+的比例。 113圖三十五、鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株感染後大蠟蛾幼蟲的存活率 114圖三十六、鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株感染後大蠟蛾幼蟲的體重變化。 115圖三十七、鮑氏不動桿菌野生株及adh突變株感染後大蠟蛾幼蟲的黑化反應。 116圖三十八、鮑氏不動桿菌中含鐵醇脫氫酶在醇類代謝及抵抗壓力中扮演的角色。 117附錄一、2008至2017年第4季加護病房不分部位常見之醫療照護相關感染菌種排名 118附錄二、2008至2017年第4季加護病房部位別常見之醫療照護相關感染菌種排名 119附
錄三、質體pRsetB-His7tag-Peredox-mCherry基因圖譜 120參考文獻 121
小型肝細胞癌經皮酒精注射治療之臨床監視及決策分析
為了解決Astone KA21 PTT 的問題，作者廖朝聖 這樣論述：
研究背景：小型肝細胞癌接受經皮酒精注射治療後，死亡危險性是否會隨著時間而增加；這些小腫瘤預後如何被治療前變項及一群隨時間變動之預測因子所影響極少被提及。除了以死亡作為主要研究終點之外，利用經皮酒精注射治療後腫瘤復發作為中介終點，已成小型肝細胞癌接受經皮酒精注射治療後，臨床監測的核心主題。病程中治癒 ─ 復發的發展也提高了小型肝細胞癌接受經皮酒精注射治療的成本，引起對小型肝細胞癌接受經皮酒精注射治療，或手術切除之成本效果分析的注意。 研究目的：本研究目的在發展一個從治療前相關變項，並採用非恆定死亡率與因時變動的預測變項對主要終點 ─ 死亡的完整評估，對
基於腫瘤復發的中介終點加以評估，並對小型肝細胞癌接受經皮酒精注射治療與手術療法進行成本效果評估。 研究方法：本研究對108名小型肝細胞癌(小於5公分)患者，接受經皮酒精注射治療或合併動脈血管栓塞的病程發展及預後評估。所有病患之肝功能皆在Child-Pugh A(84人)及Child-Pugh B(24人)。治療後每月死亡危險性亦取對數納入評估，利用Weibull模式闡明治療前臨床病理檢測變項。系列臨床及實驗室檢查監測資料皆由病歷回顧獲得，我們利用時間相關Cox回歸模式建構預測病患死亡風險即時變動評分系統。並利用三階段連續型馬可夫模式估計相關轉移參數 研究
結果： 一、病患月死亡率增加為4.7%(百分之九十五信賴區間:3.7%-5.7%)，Child-Pugh B病患之死亡相對危險性為2.8倍(百分之九十五信賴區間:1.52-5.16)。AST較高者或酒精性肝硬化者死亡之相對危險性為兩倍(百分之九十五信賴區間:1.14-3.42)。 二、某些預測因子的時間序列變化與累積存活曲線平行，高血清胎兒蛋白為最顯著的時間相關預測因子，其他顯著預測因子包括Asparatate transaminase, Bilirubin, Alkaline phosphotase, Albumin, 及Prothrombin tim
e。即時變動死亡風險評分系統顯示：六個月，一年，及兩年存活預測臨界值各為48，39及36；其對應敏感度為100%，85%，74%；特異度為97%，96%，88%。本預測模式特別是一年內之預測有好的效度。 三、小型肝細胞癌病人約57.19%(95%信賴區間39.82%-74.56%)治療後進入初次治癒階段，年齡和腫瘤大小數目為兩個顯著影響因子。每增加一歲伴隨3%復發風險(OR-1.03; 95%信賴區間:1.00-1.06)，也伴隨增加2%再度治癒的機率。大型或多發性腫瘤較單一或小腫瘤有3.7倍的機會(OR-1.03; 95%信賴區間:1.99-6.86)復發；也有2.22倍
( 95%信賴區間:1.06-4.64)再治癒機率。其他因時變動的顯著影響因子包括胎兒蛋白，白蛋白，球蛋白，AST大於100 U/L，高膽紅素，高鹼性磷酸脢及凝血脢元時間延長。 四、接受經皮酒精注射治療小型肝細胞癌患者在治療後頭45個月有較佳存活情形；但隨後手術治療組存活情形及超越經皮酒精注射治療組，經皮酒精注射治療及手術治療五年存活率分別為19%及33%，平均成本效果比分別為每增加人月需新台幣19,972.22元及18,748.45元，增加成本效果比為新台幣33,274元。 結論：本論文發展對小型肝細胞癌經皮酒精注射治療的評估系統，對臨床患者接受經皮酒
精注射治療提供極大助益。