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國防醫學院 醫學科學研究所 胡幼圃所指導 李芷葶的 非酒精性肝臟疾病之治療及Cytochrome P450 的變化 (2013),提出AMG line PTT關鍵因素是什麼,來自於非酒精性肝臟疾病、非酒精性肝炎、細胞色素P450、半乳糖單點法。
而第二篇論文國立中山大學 生物醫學研究所 張雅雯、張榮賢、陳慶鏗所指導 吳心怡的 延腦鼻端網狀腹外側核中泛素-蛋白酶體系統於實驗性內毒素敗血症腦幹死亡模式之角色 (2011),提出因為有 泛素再循環、第二亞型一氧化氮合成酶、泛素–蛋白酶體系統、延腦鼻端網狀腹外側核、腦幹死亡的重點而找出了 AMG line PTT的解答。
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非酒精性肝臟疾病之治療及Cytochrome P450 的變化
為了解決AMG line PTT 的問題,作者李芷葶 這樣論述:
中文摘要非酒精性肝臟疾病(nonalcoholic fatty liver disease; NAFLD)影響開發國家中3分之1的成人,兒童人口也正在增加中,這是一個正在萌發的健康問題,它的主要特徵是脂肪大量堆積(以triglycerides; TG為主)。病程進展主要是先形成單純性脂肪肝,再引起非酒精性脂性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis; NASH),進而造成肝纖維化甚至是肝硬化等。肝臟病理組織切片仍然是評估肝臟受損後,産生脂肪變性和纖維化發炎症狀的黄金標準,但侵入性所造成的副作用和嚴重取樣差異(sampling variability)使它的應用受限制。
目前没有實驗檢驗值可以正確診斷NAFLD,這個可能原因是具有相同基因的肝細胞,因其所在區域微環境之差異而表現出不同的新陳代謝能力及肝結構的複雜性。過去研究已經集中在生活方式修正和藥物治療,但到目前利用phase III隨機控制試驗,評估藥物控制NAFLD病人病理組織切片和長期藥物使用結果的有效性,仍缺乏有效的結果。到目前為止,没有標準治療規範已被認可。本論文分4部分進行探討:促進 NAFLD的診斷;尋找對抗NAFLD最有效果的治療;探討Cytochrome P450 (CYP)酵素NAFLD變化情形;探討天然純成份及常用藥品賦型劑Hu 25、Hu 33和EPA治療動脈粥狀硬化的效果。第一部份:
促進NAFLD的診斷方法,是利用SD大白鼠產生3組不同嚴重程度NAFLD。正常組是餵食正常飼料;2組實驗組是餵食choline-deficient (CD)飼料,有或没有用silymarin做治療。在4、8和18週,用半乳糖溶液(0.5 g/kg/BW)快速靜脈注射,60分鐘後取内頸動脈血,進一步做生化檢驗和半乳糖分析。移除肝臟是為了做hematoxylin-eosin (H & E)染色和測量肝臟脂質的含量。結果顯示NAFLD肝臟組織切片評分結果的嚴重度和galactose single point method (GSP)、alkaline phosphatase (ALP)、alanin
e-aminotransferase (ALT)、aspartate-aminotransferase (AST)、albumin和total protein(TP)有顯著相關。邏輯斯迴歸(Logistic regression)的結果,GSP和TP是最顯著的預測參數。ALT預測NAFLD經由receiver-operating characteristic曲線,尋找最佳cutoff point後,靈敏度(Sensitivity)和特異性(Specificity)分別是72.4%及52.4%;單獨GSP靈敏度和特異性分別是82.8%及72.4%;然而GSP併用TP靈敏度和特異性分別是82.8%
及81.0%。由研究結果顯示單獨使用GSP或GSP併用TP比起傳统生化檢驗對NAFLD的診斷有最大的靈敏度和特異性。第二部份:尋找最有效的治療藥物。首先成功建立Hep G2 cells用oleic acid誘導形成脂肪細胞的體外篩選模式,尋找有效NAFLD治療藥物。研究方法是根據Harken等人的方法製備,將Oleate/albumin complex加入人類肝細胞(Hep G2)培養24小時,誘發脂肪堆積產生脂肪細胞,再將38種中藥純成份各别培養72小時後,測量Hep G2脂肪細胞中TG的含量。結果顯示在被篩選38種中藥純成份中,在1~5 µM濃度下,發現silymarin、Hu 25、Hu
33和EPA是最有效降低肝細胞內TG堆積。在進入動物實驗驗証治療效果前,Bioflavonoids類藥物不溶於水導致口服bioavailability低,因此需要選擇最佳賦型劑增加藥物血中濃度。依文獻選出常用賦型劑,將bioflavonoids類藥物溶解後,以口服給予SD大白鼠。聚乙烯導管(PE-50) 做右頸動脈插管,以利抽血用。在給藥後0.083, 0.167, 0.33, 0.67, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24 and 48小時,以內頸動脈插管方式在各時間點皆取300 μL全血,再以13,000 rpm離心10分鐘獲得血漿。血漿檢品處
理後,利用LC-MSMS分析藥物濃度並選出最佳賦型劑。在被篩選的賦型劑中 Hydroxypropyl methylcellulose (HPMC) E4 M CR有最高藥物血中濃度,經藥動學參數模擬計算以100 mg/kg/day的劑量給藥,藥物藥中濃度可到達5 µM。評估silymarin、Hu 25、Hu 33和EPA治療脂肪肝的效果及CYP酵素治療前後變化情形。利用SD大白鼠餵食CD飼料產生NASH。正常組餵食正常飼料;空白組餵食CD飼料;控制組餵食CD飼料和HPMC E4M CR;治療組餵食CD飼料與各別silymarin、Hu 25、Hu 33和EPA 100 mg/kg/day做治
療。在4和8週後犧牲動物,血液部份進行肝功能評估(GSP、ALT、ALP、total protein)及血脂分析[TG、Total cholesterol (THCO)、Low-density lipoprotein (LDL)、High-density lipoprotein HDL];抗氧化實驗的部份進行superoxide anions、8-iso-PGF2α和malondialdehyde三項分析;肝臟部份進行H & E染色和測量肝臟脂質的含量。研究結果顯示經Hu 25和Hu 33 治療後肝細胞中TG堆積狀況和GSP值比blank和control組顯著降低。在氧化壓力指標,經Hu 25
、Hu 33和EPA治療後血漿中8-iso-PGF2α的濃度皆比blank和control組顯著降低很多。Hu 25和EPA治療後肝臟中O2-.的濃度皆比blank組顯著降低很多。第三部份:CYP酵素變化情形。silymarin治療4週後,CYP2B6、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP4A和UGT2B7的活性比正常組SD大白鼠顯著降低;治療8週後,CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性比正常組SD大白鼠顯著升高。Hu 25治療4週後有3個(CYP1A2、CYP2E1和CYP4A)受影響;治療8週後 CYP2B6、CYP2C19、CYP2D6
、CYP3A4和UGT2B7活性呈現誘導的作用。Hu 33治療4週後有5個受影響,其中CYP1A2、CYP2E1和CYP4A呈現抑制的作用;治療8週後CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和UGT2B7活性呈現誘導的作用。EPA在4和8週治療結果很類似。CYP2D6、CYP3A4和UGT2B7的活性比正常組SD大白鼠顯著降低;CYP1A2的活性比正常組SD大白鼠顯著升高。我們利用GSP、steatosis、hepatic lipid content等測量值解釋CYP酵素改變的情況。研究方式是利用SD大白鼠產生3組不同嚴重程度的NASH,正常組餵食正常飼料;2組實驗組是餵食CD
飼料,有或沒有用silymarin做治療。在4和8週後,血液檢體測生化檢驗值和半乳糖分析;肝臟做H&E染色和測量脂質含量。結果顯示,在CD和治療組steatosis和inflammation有顯著增加;ALP、ALT、GSP、肝細胞中TG含量 (HTC)在CD組有明顯升高;肝細胞中cholesterol含量(HCC)在CD和治療組都比正常組下降。經逐步多元線性回歸模式分析顯示,併用steatosis和GSP可以預測73.5% UGTB2B7的變異;併用GSP和HCC可以預測51.1% CYP2C9的變異;併用GSP、steatosis和HTC可以預測50.9% CYP1A2的變異;然而併用GS
P和HTC只能預測14.4% CYP2E1的變異;GSP只能預測11.2% CYP2C19的變異。GSP和HTC對CYP2E1及CYP2C19屬於低相關,這可能還包括free radical generation、inflammatory cytokines、interferon等其他因素牽涉其中。第四部份:評估天然純成份及常用藥品賦型劑Hu 25、Hu 33和EPA治療動脈粥狀硬化的效果。利用Syrian hamster餵食high-fat (HF)飼料產生高血脂症。正常組餵食正常飼料;空白組餵食HF飼料;positive control組餵食HF飼料和fluvastatin;治療組餵食HF
飼料與各別Hu 25、Hu 33和3種不同劑量EPA做治療。在12週後犧牲動物,血液部份進行肝功能評估(GSP、ALT、AST和TP)及血脂分析(TG、THCO、LDL、HDL);肝臟部份進行H&E染色。研究結果顯示經Hu 25、Hu 33與不同劑量EPA這5組治療後都能改善高血脂;Hu 33與L-EPA肝功能優於blank與positive control組,這2組有改善脂肪肝和保護肝功能之效果。綜合上述結論,GSP可幫助NAFLD診斷;由體外篩選模式選出天然純成份及常用藥品賦型劑silymarin、Hu 25、Hu 33和EPA是最有效降低肝細胞內TG堆積;Hu 25、Hu 33和EPA除
了可以治療脂肪肝外,對治療動脈粥狀硬化也有效;用GSP值、steatosis評分、肝臟脂質含量等測量值可以預測UGT2B7、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2E1變異情形。CD飼料餵食4週後,CYP1A2、CYP2C9和UGT2B7活性比正常組顯著降低,CYP2E1活性有顯著升高。8週後CYP1A2和UGT2B7活性比正常組顯著降低。Hu 25治療4週後有3個(CYP1A2、CYP2E1和CYP4A)受影響;治療8週後CYP2B6、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和UGT2B7活性呈現誘導的作用。Hu 33治療4週後有5個受影響,其中CYP1A2、CYP2E1和CY
P4A呈現抑制的作用;治療8週後CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和UGT2B7活性呈現誘導的作用。EPA在4和8週治療結果很類似。CYP2D6、CYP3A4和UGT2B7的活性比正常組SD大白鼠顯著降低;CYP1A2的活性比正常組SD大白鼠顯著升高。CYP酵素活性容易在長期服用藥物後受影響產生誘導或抑制的作用,因此需要評估CYP酵素活性變化情形,避免藥物交互作用及副作用的產生。
延腦鼻端網狀腹外側核中泛素-蛋白酶體系統於實驗性內毒素敗血症腦幹死亡模式之角色
為了解決AMG line PTT 的問題,作者吳心怡 這樣論述:
本實驗室早期透過昏迷病患之動脈壓頻譜偵測到源自於延腦鼻端網狀腹外側核之 “生與死” 的訊息,且其訊號消失於隨之而來的腦死之前。除此之外,於一系列之研究中進一步發現存在於延腦鼻端網狀腹外側核中之第二亞型一氧化氮合成酶於腦死過程中表現量增加是導致腦幹喪失調控心臟血管功能的主要原因。泛素–蛋白酶體系統已被證實不僅能調控參與第二亞型一氧化氮合成酶蛋白質新生成之路徑,亦能直接降解其蛋白質。因此,本論文進一步探討泛素–蛋白酶體系統於此模式下如何透過雙方面調節第二亞型一氧化氮合成酶蛋白質表現量與其於腦幹調控心臟血管功能之影響。我們採用Sprague-Dawley雄性大白鼠模擬臨床上腦幹死亡模式。前處理微量
注射蛋白酶體活性抑制劑(lactacystin或proteasome inhibitor II)於雙側延腦鼻端網狀腹外側核中能阻斷因靜脈注射大腸桿菌酯多糖所誘發的低血壓與“生與死” 的訊號降低之現象,然而前處理泛素再循環抑制劑以及Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L1 (UCH-L1) 活性抑制劑卻造成更嚴重的低血壓以及“生與死”訊號之消失。此外,透過反轉錄聚合酶鏈式反應、西方墨點法、電泳移動遷移分析、染色質免疫沈澱分析以及共同免疫沈澱實驗等等之分子生物技術進一步發現蛋白酶體抑制劑能拮抗此模式下存在於細胞質中受磷酸化之I-κBα於第三期表現量降低、轉錄
因子nuclear factor κB(NF-κB)於細胞核中之表現量以及其與第二亞型一氧化氮合成酶啟動子結合之表現量增加的現象。相較於前處理proteasome inhibitor II,利用decoy κB DNA抑制NF-κB啟動第二亞型一氧化氮合成酶基因的作用對於其蛋白質表現量抑制程度更多。前處理UCH-L1活性抑制劑會提高延腦鼻端網狀腹外側核中之第二亞型一氧化氮合成酶之蛋白質表現量與動物的死亡率,而其mRNA表現量於在此時期尚未顯著改變。根據本論文之研究結果,我們認為延腦鼻端網狀腹外側核中的泛素–蛋白酶體系統於實驗性內毒素敗血症腦幹死亡過程中透過活化NF-κB路徑開啟第二亞型一氧化氮
合成酶之新生成以及對此合成酶直接進行降解作用之雙方面調節的機制,進一步參與腦幹於心臟血管之調控。我們的研究結果對於治療這類致命的病理現象提供了一些新穎的訊息。
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